EX-CELL®Advanced™CHO流加培养基

化学成分限定的、无动物源成分的培养基，适用于CHO细胞 不含L-谷氨酰胺，不含次黄嘌呤，不含胸腺嘧啶核苷

液体：货号14366C

干粉：货号24366C

说明

EX-CELL®Advanced™CHO 流加培养基为化学成分 限定的下一代培养基平台。为开发该配方，对 10,000+ 数据点使用了多元分析（包括性能、物理、法规和安全设 计规范）。该培养基与 Advanced CHO Feed1 联合使 用，为所有工业用 CHO 细胞谱系（CHO-S、DuxB11、 DG44、CHO-M 和 CHOZNGS）的流加培养提供优越 的平台性能。

预期用途

该产品旨在用于生物制造行业的进一步生产用途。它不 旨在也未被批准用于人或动物的体外诊断。

产品操作处置与储存

若液体培养基浑浊或含有沉淀物，不要使用。干粉产品应 当在 2–8°C 下干燥储存，并避免光照，可保存 1 年。液体 产品应当在 2–8°C 下储存，并避免光照，可保存 1 年。操 作处置或补充该培养基时，使用无菌技术。阅读安全技术 说明书 (SDS)，遵循操作处置说明。穿戴适当的护眼装 置、衣服和手套。

使用方法

干粉（货号 24366C）的配制说明

1. 量取 80% 最终所需体积的细胞培养级水。建议水温 为 25-40° C。边搅拌时，边缓慢添加干粉粉末培养基 (22.09g/L)。 2. 继续搅拌 15 分钟，产品将保持略微混浊。 3. 将 pH 调整到 5.0。 4. 继续搅拌 5 分钟，产品将部分澄清。 5. 添加 1.9g/L 碳酸氢钠。 6. 继续搅拌至少 30 分钟，直至产品澄清。 7. 用细胞培养级水，QS 到 95% 体积。 8. 将 pH 调整到 7.2。（范围 7.1-7.3） 9. 用纯化水，QS 到 98% 体积。 10. 测量溶液渗透压浓度应当为 280–320 mOsm/kg。 11.QS 到 100% 最终体积。 12. 用低蛋白结合滤膜，立即除菌过滤。（<0.22 微米） 13. 2-8°C 下避光储存产品，直至使用

EX-CELLAdvancedCHO 流加培养基配方中不含谷氨酰 胺，不含次黄嘌呤 / 胸腺嘧啶核苷。 无菌添加说明：

1. 应用于非 GS 筛选系统，在应用前，添加 L- 谷氨酰胺 （货号 59202C）至最终浓度 2–8mM。 2. 用于非 DHFR 系统，在应用前，添加 HT 培养基补充物 （货号 H0137）。

注意：添加物的性质可能影响产品的储存有效期。

开始培养

1. 在 37°C 水浴中，快速解冻（<1 分钟）一支冷存细胞。

2. 将全部内容物无菌转移到 125mL 摇瓶（内盛 30mL 已预热的完全 EX-CELL Advanced CHO 培养基）中。

3. 在转速为 120–140rpm 的轨道摇动器平台的摇床 （19mm 直径轨道）上，维持一定的湿度，5%CO2，在 37°C 下培养。

4. 收获后的头两次传代，保持细胞密度为 0.5–1 ×106 活细胞 /mL；此后，回到您的正常细胞维持培养计划。

传代培养

1. 确认培养器被设定为 37°C、5%CO2，有水用于湿度 控制 (~80%)。

2. 将完全的 EX-CELL Advanced CHO 流加培养基预 热到室温。

3. 从摇瓶中无菌取出少量细胞培养物样品，采用台盼蓝 染色，使用血细胞计数器或自动细胞计数器进行计数。若 细胞活力小于 90%，不要继续进行。注意：若细胞活力 低于 90%，继续培养前查找并排除故障。

4. 每 个 125-mL 摇瓶中有 30mL 新 鲜 EX-CELL Advanced CHO 流加培养基，确定接种所需细胞培养物 的体积，使接种后初始细胞密度为 2–3x105 细胞 /ml。

5. 将适当数量的细胞无菌转移到新摇瓶中，添加已预热 的培养基到所期望的体积。

6 . 在维持一定湿度的 37°C 培养器，5%CO 2 ， 120–140rpm，对摇瓶进行培养。

7. 传代细胞：至少每周重复两次上述步骤，按需扩大培 养物体积。注意：细胞传代时，培养基携带应当不超过最 终体积的 25%。若携带超过 25%，建议采用离心分离。

细胞冻存

1. 准备所期望数量的细胞，在对数生长中期收获，活力 >90%。

2. 准备由 46.5% 冷 EX-CELL® Advanced™CHO 流 加 培 养 基、46.5% 条件培养基和 7% 二甲亚砜 (DMSO) 组成的冷冻培养基。

3. 在 200g 下离心分离 5 分钟，去除上清液。

4. 使用冷冻培养基重新悬浮细胞沉淀至 5x106~1x107 细胞 /mL。

5. 将 1–2mL 该悬浮液快速转移到无菌冻存管中。

6. 将冻存管放在受控速率冷冻装置中，遵循标准程序（每 分钟降低 1°C）。

7. 若长期储存，将冻存管转移到液氮中（蒸气相）。