金属螯合层析，又称固定化金属离子亲合层析（Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC）， 是近30年发展起来的一种新型分离技术。该层析技术利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸、色氨酸、半胱 氨酸等能和金属离子发生特殊的相互作用的原理，从而对蛋白质加以分离。这些作用包括配价键结合、静电吸 附、共价键结合，其中以配价键结合为主，而且这其中又以6组氨酸标签（His-Tag）应用最为广泛。

Fractogel® EMD Chelate填料中多个作为金属螯合亲和层析配体的亚氨基二乙酸分子（IDA）固定在聚合物长 链上（触手），为各个官能团在空间上提供了最佳的立体结合性能。因此，生物大分子可以有效地特异性结合。

图 1. 使用 Fractogel® EMD Chelate 填料，纯化葡糖激 酶（来自酵母）。

在固定的钴离子上，执行金 属螯合层析。在由高到低 pH 线性梯度的洗脱过程中，可 将纯化酶集中一个峰处洗 脱。含有 1 M KCl

和 10 mM 葡萄糖的 20 mM 磷酸盐缓 冲液（pH 7.5）， 被用作缓冲 液 A。将缓冲液 A 调整到 pH 值为 6.0，用于洗脱。

对于 Fractogel® EMD Chelate，选择亚氨基 二乙酸作为功能亲和配基。该配基非常适 合于金属离子配位作用。金属离子的自由 配位点，被用来与各种蛋白质和肽结合。

Fractogel® EMD Chelate 螯合填料的主要应用领域

• 非常适合于分离重组、组氨酸标签蛋白质

• 肽的分离

• 柱内的在位复性

Fractogel® EMD Chelate金属螯合层析填料的特性：

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